我们在使用流式细胞仪检测外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)时，是不是常会发现CD3+T细胞的比例稍高与CD4+T细胞与CD8+T细胞的比例之和？这是因为在CD3+T细胞中，不仅含有CD4+CD8-T细胞和CD4-CD8+T细胞，还含有少量的CD4+CD8+T细胞和CD4-CD8-T细胞，如图一。
图1 PBMC流式分析
那么，我们现在先来认识一下CD3+CD4-CD8- T细胞到底是什么细胞？
CD3+CD4-CD8- T细胞主要有两类：一类是CD4-CD8-双阴性T细胞（Double negative T cell，DNT细胞），另一类是γδ T细胞。这两类T细胞的共同特点是都不表达CD4与CD8（少数位于肠道的γδ T细胞可能表达CD8α）；不同点在于细胞表面的TCR不同，DNT细胞的TCR是由α和β两条肽链组成的，而γδ T细胞的TCR是由γ和δ两条肽链组成的，如图2。因此，DNT细胞的表型是TCRαβ+CD3+CD4-CD8-，而γδ T细胞的表型则是TCRγδ+CD3+CD4-CD8-。
图2 T细胞分化发育过程（图来源网络）
（1）DNT细胞属于T细胞的一种亚型，在正常人体内，DNT细胞数量极少，仅占外周T淋巴细胞的1%-2%。对于DNT细胞的起源，研究虽多，却未有定论。根据研究成果，总结出DNT细胞的来源包括：
①DNT细胞可以通过胸腺内特殊途径分化成熟；②DNT细胞经过非胸腺途径的内分化途径成熟；③DNT细胞经过特殊环境由外周T细胞直接分化而来；④因为可能存在不同亚型的DNT细胞，所以可能存在多种不同的成熟细胞通路和分化途径。DNT细胞来源不同，其所产生的细胞因子亦不同。胸腺来源的DNT细胞产生大量的IL-10，而从血液或外周淋巴器官获取的DNT细胞并不产生IL-10，而是分泌大量的IFN-γ、TNF-α和微量的TGF-β。
（2）DNT细胞具有调节免疫应答能力。DNT细胞不仅在自身免疫性疾病和器官移植免疫方面起着重要作用，还具有抗肿瘤作用。例如，在自身免疫性淋巴增生综合征（ALPS）中，DNT细胞明显增高。在ALPS的诊断标准中，其中一个必需标准是淋巴细胞计数正常或略增高，但CD3+TCRαβ+CD4-CD8- 双阴性T细胞比例增高（≥总淋巴细胞的1.5％，或≥CD3＋淋巴细胞的2.5％）。DNT细胞在系统性红斑狼疮（SLE）的病人中高于正常水平，且可产生IL-4和IFN-7。这些功能类似Th的DNT细胞可协助CD1c B细胞产生IgG。DNT细胞可通过Fas/FasL途径、颗粒酶/穿孔素途径和分泌细胞因子等方式来杀伤肿瘤细胞。此外，DNT细胞在体外被激活后可产生IL-4和IL-10，这显示其可能具有一定的抑制性免疫调节功能。
（3）γδ T细胞是一类不同于αβ T细胞的T细胞亚群，占T淋巴细胞的1%-10%。γδ T细胞主要分布于外周血以及肠道、呼吸道、泌尿生殖道等黏膜组织和皮肤，外周血中的γδ T细胞约占人体总γδ T细胞的90%以上。γδ T细胞多为CD4-CD8-表型，但位于肠上皮内的γδ T细胞会表达辅助受体CD8α。γδ T细胞在生物进化上比传统的αβ T细胞早出现，可能在生物进化出适应性免疫的早期就出现γδ T细胞了，因此γδ T细胞既保留了先天性免疫的特性，又有适应性免疫的特性，被认为是先天性免疫和适应性免疫的“桥梁”。
γδ T细胞有独特的抗原受体，识别抗原不受MHC限制，主要识别CD1分子提呈的糖脂、某些病毒的糖蛋白、分枝杆菌的磷酸糖和核苷酸衍生物等，因此γδ T细胞是一类CD1限制性T细胞。活化的γδ T细胞可通过释放穿孔素、颗粒酶和表达FasL等方式杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞，还可分泌IL-17、INF-γ和TNF-α等细胞因子来发挥免疫调节作用和介导炎症反应。早在1989年，已有报道指出γδ T细胞参与机体对结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis，Mtb) 的免疫应答，γδ T细胞被认为在抗分枝杆菌免疫中起关键作用，在Mtb感染后，受到Mtb抗原刺激的γδ T细胞迅速发生活化，发挥保护性免疫的作用。
虽然γδ T细胞在外周血中数量很少，但结核杆菌低分子多肽抗原、热休克蛋白70多肽、异戊烯焦磷酸（IPP）和帕米磷酸钠（PAM）等均可有效地诱导γδ T细胞发生增殖，IL-2具有协同对γδ T细胞的促增殖作用。
参考资料：
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