抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的药物,具有特异性高、性质均一、可针对特定靶细胞定向制备等优点,在各种疾病治疗、特别是对肿瘤治疗的应用前景备受关注。当前,抗体药物的研究与开发已成为生物技术药物领域研究的热点,居近年来所有医药生物技术产品之首。一般的单抗类药物的非临床评价主要包括药效学研究、药代动力学研究、安全药理研究、单次给药毒性研究,重复给药毒性研究,免疫原性、免疫毒性研究和局部耐受性研究等等,而这些关键的安全性评价检测需要使用 PBMC 检测。因此 PBMC 的标准化生产尤为重要。

PBMC 介绍
外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC) 即外周血中具有单个核的细胞,主要包括淋巴细胞(T/B)、单核细胞、吞噬细胞、树突状细胞和其他少量细胞类型,是机体免疫应答功能的重要细胞组成。PBMC 是免疫学领域,抗体药物研发,感染性疾病领域,恶性血液疾病,疫苗开发以及移植免疫等领域学者经常需要的研究原材料。常用于获取纯化的亚群细胞(B、T、NK 细胞等)用于单个亚群细胞特性的研究或者亚群之间相互关系的研究、单克隆抗体药物研发(基于 B 细胞的 cDNA 文库的构建、人源化小鼠模型的构建、ADCC assay 等)、anti-GVHD 药物研究用等。
PBMC 生产方法是 Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异,因此得以分离。
 
制备流程:
 
PBMC 在药物研发中的应用

抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用 (ADCC)
通过细胞和基因工程增强抗体依赖性细胞毒(ADCC)杀伤肿瘤效应。
ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用,antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)是一种细胞介导的免疫防御机制,是免疫细胞消灭已结合特异性抗体的病原靶细胞的作用方式。表达 Fc 受体的免疫细胞通过识别抗体的 Fc 段激发 NK/巨噬细胞等效应细胞的杀伤活性,释放穿孔素和颗粒酶,杀伤与抗体特异性结合的靶细胞的作用。
ADCC 作用机制被用来检测、评定抗体或靶细胞的功效。以 ADCC 作用机制为原理,检测抗体是否具有 ADCC 生物学活性,并进一步分析抗体 ADCC 生物学活性的强弱已成为抗体药物研发及其质量控制过程中至关重要的一步。
采取一系列不同的检测指标对不同的抗体药物进行 ADCC 生物学活性检测及定量分析。选用来自不同基因型供体的,新鲜制备的外周血单核细胞 (peripheral blood mononuclear cell,PBMC) 对候选抗体药物进行 ADCC 活性检测。

ADCC 是利用抗体介导药物杀伤靶癌细胞的理想机制。抗体与细胞表面上的目标抗原结合。如果抗体的 Fc 段同时结合到效应细胞(主要为自然杀伤细胞, natural killer cells)表面的 Fc γ RIIIa 受体上,两种类型的细胞即发生多重交联,导致 ADCC 作用机制通路的激活。 靶细胞的杀伤是此活化途径的终点,这一指标被用在经典的 ADCC 生物活性检测中,这些经典的检测方法利用供者的外周血单核细胞(PBMC)或自然杀伤(NK)细胞亚群作为效应细胞。

人源化小鼠模型 PDX
人源化小鼠模型是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型。这种模型通常被用做人类疾病体内研究 (in vivo study) 的活体替代模型。在阐明发病机制、药物筛选等方面有巨大的优势和广泛的应用前景。由于免疫缺陷小鼠缺乏免疫力,相对容易接受异种细胞或组织,作为人源化动物模型的应用性更强。目前,人源化小鼠模型已广泛应用于基础及临床研究,主要涉及肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病和代谢性疾病等方面。而越来越多的新型人源化小鼠模型也在不断产生。
构建人源化小鼠模型 :
1.PBMC 移植小鼠模型
2.CD34+ 造血干细胞移植小鼠模型
鉴定 PDX 小鼠体内免疫系统是否成功重建的方法
1. 流式细胞术检测人类细胞特异性标记(如 HLA- A,B,C 或 CD45)阳性细胞的比例及绝对数
2.ELISA 法测定小鼠血清中人类免疫球蛋白(如 lgG、lgM)的含量
3.PCR 技术检测 HLA- A,B,C 或 CD45 的 mRNA.

雷德生物提供的 PBMC 细胞产品优势如下:
1.GMP 标准车间生产
2. 用 AO/PI 检测细胞活性,保证新鲜细胞活性>90%,冷冻产品复苏后活性>85%;
3. 细胞质量批间差受控
4. 能提供各个亚群细胞(CD3+、CD4、CD8
+、CD19+、NK 细胞等)